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赫澎(上海)生物科技有限公司
HePeng(Shanghai)Biotech.,Ltd.
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組織鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒
產品編號 HPBIO-JM1446
中文名稱: 組織鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒
英文名稱:
品牌: 赫澎生物HE[ENGBIO
規格型號: 20次
鈣是人體中的一種重要電介質和礦物質,占1150克。其中99%的鈣以氟磷灰石鈣(calcium fluorophosphate apatite)形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細胞內。鈣具有兩種主要形式:一種是非彌散型蛋白結合鈣,其構成約40%至50%的血清中的總鈣含量;另一種為彌散型游離鈣,其進一步分成具有活性的復合鈣(complexed calcium)和離子鈣(ionized calcium)。鈣對神經肌肉興奮性(neuromuscular excitability)、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經傳導介質、信使傳導等方面起著重要作用。鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法(flame photometry)、原子吸收分光光度法等,但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求。Fluo-4,一種與鈣離子結合,其熒光強度迅速增強100倍的熒光探針,可以敏感測定微量游離鈣離子水平。在熒光分光光度儀下,激發波長485nm,散發波長520nm,來定量測定組織細胞的鈣濃度。
 
產品內容
 
HEPENGBIO清理液(Reagent A)      毫升
HEPENGBIO裂解液(Reagent B) 毫升
HEPENGBIO反應液(Reagent C)      毫升
HEPENGBIO飽和液(Reagent D)      毫升
HEPENGBIO陰性液(Reagent E)      毫升
產品說明書    1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO清理液(Reagent A)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里;HEPENGBIO反應液(Reagent C)避免光照;有效保證6月
 
用戶自備
 
1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器
15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器
DOUNCE勻漿器:用于樣品制備
超聲儀:用于樣品制備
微型臺式離心機:用于樣品沉淀
培養箱:用于反應物孵育
黑色96孔板:用于樣品熒光測定的容器
熒光酶標儀:用于樣品熒光分析
 
實驗步驟
 
一、 樣品準備
 
1. 手術取出動物組織,并秤重以確定500毫克組織重量 
2. (選擇步驟)放進預冷的15毫升錐形離心管
3. (選擇步驟)加入xx毫升HEPENGBIO清理液(Reagent A)清洗1次
4. 移入到一個液氮凍存管
5. 即刻放進液氮罐過夜
6. 次日從液氮罐里取出,即刻(最快速度)用研磨棒碾碎組織成粉末狀(注意:切莫使組織凍融
7. 放進一個15毫升錐形離心管
8. 加入預冷的xx微升HEPENGBIO裂解液(Reagent B) 
9. 渦旋震蕩5秒,充分混勻
10. 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器
11. 在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約20至40下)
12. (或超聲處理:100瓦,10秒一次,間隔1分鐘,重復3次)
13. 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管
14. 轉移到預冷的1.5毫升離心管
15. 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
16. 小心移取500微升上清液到新的預冷的1.5毫升離心管
17. 移取10微升進行蛋白定量檢測(注意:建議使用HEPENGBIO Bradford蛋白質濃度定量試劑盒-HEPENGBIO30030.1
18. 即刻放進-70℃保存或置于冰槽里繼續后續操作
 
二、 測定準備
 
1. 準備好上述制備的待測樣品,置于冰槽里備用
2. 設定好熒光酶標儀(22℃):激發波長485nm,散發波長520nm
 
三、熒光測定
 
1. 準備1個黑色96孔板,標記為:樣品孔、空白對照孔、最大對照空
2. 移取100微升(20微克蛋白)上述制備的樣品到樣品孔里
3. 移取xx微升HEPENGBIO飽和液(Reagent D)到最大對照空里
4. 移取xx微升HEPENGBIO陰性液(Reagent E)到空白對照空
5. 分別加入xx微升HEPENGBIO反應液(Reagent C)到所有孔里
6. 輕輕搖動黑色96孔板,混勻
7. 室溫下(22℃),孵育30分鐘,避免光照
8. 即刻放進熒光酶標儀測讀:獲得相對熒光單位(relative fluorescence unit;RFU) 
9. 計算樣品鈣離子濃度:納摩爾(注意:不要遺忘乘上稀釋倍數
檢測報告(COA)
使用說明
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