測定意義
輔酶 NAD(H)Ⅰ廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的 NADH 經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成 ATP 的同時,形成大量的 ROS,同時 NADH 再生為 NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環的強弱。較高的 NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。
測定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。