測定意義
輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NADP+和 NADPH 含量測 定可以計算 NADP(NADPH + NADP+ )含量和 NADPH/NADP+比值,其變化與磷酸戊糖途 徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要 標(biāo)志之一,而且在 PPP 途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。
測定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NADP+和 NADPH。NADPH 通過 PMS 的遞氫作用, 使氧化型噻唑藍(lán)(MTT)還原為甲瓚,570nm 下檢測吸光值,從而測定 NADPH 含量。利 用 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原 NADP+為 NADPH,從而檢測 NADP+含量。