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細胞鈣調(diào)蛋白(CaM)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒
產(chǎn)品編號 HPBIO-JM6587
中文名稱: 細胞鈣調(diào)蛋白(CaM)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒
英文名稱:
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HEPENGBIO細胞鈣調(diào)蛋白(CaM)活性酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)光度法定量檢測試劑盒
產(chǎn)品說明書
主要用途
HEPENGBIO細胞鈣調(diào)蛋白(CaM)活性酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)光度法定量檢測試劑是一種旨在通過鈣調(diào)蛋白依賴性cAMP磷酸二酯酶、肌激酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶的酶連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后吸光峰值的降低,即采用光度法來測定細胞裂解樣品中鈣調(diào)蛋白活性的方法。其適用于各種細胞裂解懸液樣品(動物、人體、昆蟲等)鈣調(diào)蛋白的活性,以及抑制劑和調(diào)節(jié)劑檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
鈣調(diào)蛋白(calmodulin;CaM)屬于鈣結(jié)合蛋白家屬中EF手型(EF hand)蛋白類之一,在所有真核細胞內(nèi)表達,分布在各種不同的亞細胞結(jié)構(gòu)中。鈣調(diào)蛋白是一種熱穩(wěn)定小分子酸性蛋白,含有148氨基酸,16.7Kd大小,4個EF手型模式(motif)。鈣調(diào)蛋白通過EF手型,與鈣離子結(jié)合,產(chǎn)生構(gòu)型變化,進而與各種蛋白結(jié)合,或反之,其它蛋白通過結(jié)合鈣調(diào)蛋白形成復合物結(jié)合鈣離子,引起一系列信號反應(yīng)機制,調(diào)節(jié)機體內(nèi)炎癥反應(yīng)、代謝、凋亡、平滑肌收縮、胞內(nèi)運動、短時或長時記憶、神經(jīng)生長和免疫反應(yīng)等,更是鈣離子感受器和調(diào)控緩沖分子。基于腺苷-3',5'-環(huán)化一磷酸磷酸二酯酶(cyclic adenine monophosphate phosphodiesterase;cAMP PDE;EC3.1.4.17 )是鈣調(diào)蛋白依賴性。鈣調(diào)蛋白激活磷酸二酯酶催化環(huán)核苷酸(cAMP)的磷酸二酯鍵(phosphodiester bond)的水解,產(chǎn)生1-磷酸腺苷,進而通過肌激酶(myokinase)、 丙酮酸激酶(pyruvate kinase)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase)系統(tǒng),測定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidized nicotinamide adenine dinucleotide;NAD)的吸光峰值的變化(340nm 波長),來定量分析鈣調(diào)蛋白的活性。其連續(xù)循環(huán)反應(yīng)系統(tǒng)為:
 
     phosphodiesterase 
cAMP  +  H2O     →      AMP  
calmodulin
 
myokinase
AMP  +  ATP  →  2 ADP
 
pyruvate kinase
2 ADP  + 2 phosphoenolpyruvate   →    2 ATP  +  2 pyruvate   
 
lactate dehydrogenase 
2 pyruvate  +  2 NADH    →  2 lactate  +  2 NAD+ 
(高吸收峰) (低吸收峰)
產(chǎn)品說明書      1份
保存方式
保存HEPENGBIO清理液(Reagent A)保存在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里;HEPENGBIO反應(yīng)液(Reagent D)避免光照;有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器
15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器
細胞刮脫棒:用于細胞脫離
DOUNCE勻漿器:用于細胞勻化
(微型)臺式離心機:用于樣品操作
200微升1厘米光徑比色皿或96孔板:用于光度分析的容器
分光光度儀或酶標儀:用于光度分析

 
檢測報告(COA)
使用說明
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