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HEPENGBIO植物查爾酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品說明書
主要用途
HEPENGBIO植物查爾酮合成酶（chalcone synthase）活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過香豆酰輔酶A和丙二酰輔酶A縮合反應(yīng)系統(tǒng)中釋放出巰基輔酶A，使用Ellman試劑后，產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物吸光峰值的變化，即采用比色法來測(cè)定植物裂解樣品中酶活性的方法。其適合于各種植物組織，包括種子（seed）、葉片（leaf）、根（root）、胚胎葉（cotyledon）、上胚軸（epicotyl）等查爾酮合成酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
查爾酮合成酶（chalcone synthase；CHS；EC2.3.1.74）是聚酮體合成酶（polyketide synthase；PKS）大家屬中的一員，是啟動(dòng)類黃酮（flavonoid）化合物合成通路中第一步關(guān)鍵酶，形成植物系統(tǒng)性獲得性抗性（systematic acquired resistance；SAR）的基礎(chǔ)。查爾酮合成酶存在于細(xì)菌、植物和真菌中。在所有裸子植物（gymnosperm）和被子植物（angiosperm）的各種不同發(fā)育階段中的不同組織中表達(dá)。查爾酮合成酶為同源二聚體，分子量為40至4000Kd，由環(huán)境壓力，包括UV照射、傷口、病原菌襲擊等誘導(dǎo)，通過丙二酰輔酶A脫羧基反應(yīng)（decarboxylation）、與香豆酰輔酶縮合、聚酮體鏈延展（chain elongation）、中間產(chǎn)物環(huán)狀化（cyclization）和芳構(gòu)化（aromatization）產(chǎn)生查爾酮，一種類黃酮化合物前體，作為化學(xué)信使，由此生成各種后續(xù)繼發(fā)性代謝化合物，參與抗病原微生物例如異黃酮植物保護(hù)素（isoflavonoid phytoalexin）、花青素花色素化、抵御環(huán)境壓力（UV光保護(hù)）、花粉育性（pollen fertility）、抗氧化、共生根系結(jié)瘤（symbiotic root nodulation），以及作為抗生素、免疫抑制劑、抗腫瘤和抗真菌的藥物作用。還在細(xì)菌的囊腫形成和阿米巴細(xì)胞分化中產(chǎn)生作用。基于香豆酰輔酶A和丙二酰輔酶A，在敏感性抑制劑木犀草素（Luteolin）存在與否的情況下，受到查爾酮合成酶的作用，縮合產(chǎn)生查爾酮，并釋放出巰基輔酶A（CoA-SH），進(jìn)而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙（2-硝基苯甲酸）[5,5,-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反應(yīng)后，產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通過其吸收峰值的變化（412nm波長(zhǎng)），來定量分析查爾酮合成酶的活性。查爾酮合成酶反應(yīng)系統(tǒng)為：
chalcone synthase
4-Coumaroyl CoA + 3 malonyl CoA → naringenin chalcone + 4 CoA-SH + 3CO2
DTNB + CoA-SH → TNB + CoA-S-S-TNB
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 60毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 20毫升
HEPENGBIO緩沖液（Reagent C） 12毫升
HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent D） 1毫升
HEPENGBIO底物液（Reagent E） 1.5毫升
HEPENGBIO專性液（Reagent F） 400微升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存HEPENGBIO緩沖液（Reagent C）、HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent D）和HEPENGBIO底物液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO反應(yīng)液（Reagent D）和HEPENGBIO底物液（Reagent E）避免光照；有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細(xì)胞
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
200微升1厘米光徑比色皿或96孔板：用于比色的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于比色分析
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查爾酮合成酶（chalcone synthase；CHS；EC2.3.1.74）是聚酮體合成酶（polyketide synthase；PKS）大家屬中的一員，是啟動(dòng)類黃酮（flavonoid）化合物合成通路中第一步關(guān)鍵酶，形成植物系統(tǒng)性獲得性抗性（systematic acquired resistance；SAR）的基礎(chǔ)。查爾酮合成酶存在于細(xì)菌、植物和真菌中。在所有裸子植物（gymnosperm）和被子植物（angiosperm）的各種不同發(fā)育階段中的不同組織中表達(dá)。查爾酮合成酶為同源二聚體，分子量為40至4000Kd，由環(huán)境壓力，包括UV照射、傷口、病原菌襲擊等誘導(dǎo)，通過丙二酰輔酶A脫羧基反應(yīng)（decarboxylation）、與香豆酰輔酶縮合、聚酮體鏈延展（chain elongation）、中間產(chǎn)物環(huán)狀化（cyclization）和芳構(gòu)化（aromatization）產(chǎn)生查爾酮，一種類黃酮化合物前體，作為化學(xué)信使，由此生成各種后續(xù)繼發(fā)性代謝化合物，參與抗病原微生物例如異黃酮植物保護(hù)素（isoflavonoid phytoalexin）、花青素花色素化、抵御環(huán)境壓力（UV光保護(hù)）、花粉育性（pollen fertility）、抗氧化、共生根系結(jié)瘤（symbiotic root nodulation），以及作為抗生素、免疫抑制劑、抗腫瘤和抗真菌的藥物作用。還在細(xì)菌的囊腫形成和阿米巴細(xì)胞分化中產(chǎn)生作用。基于香豆酰輔酶A和丙二酰輔酶A，在敏感性抑制劑木犀草素（Luteolin）存在與否的情況下，受到查爾酮合成酶的作用，縮合產(chǎn)生查爾酮，并釋放出巰基輔酶A（CoA-SH），進(jìn)而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙（2-硝基苯甲酸）[5,5,-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反應(yīng)后，產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通過其吸收峰值的變化（412nm波長(zhǎng)），來定量分析查爾酮合成酶的活性。查爾酮合成酶反應(yīng)系統(tǒng)為：
chalcone synthase
4-Coumaroyl CoA + 3 malonyl CoA → naringenin chalcone + 4 CoA-SH + 3CO2
DTNB + CoA-SH → TNB + CoA-S-S-TNB
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HEPENGBIO底物液（Reagent E） 1.5毫升
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1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細(xì)胞
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
200微升1厘米光徑比色皿或96孔板：用于比色的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于比色分析
